ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ПО СТРУКТУРНЫМ, ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫМ ЖИРНЫМ КИСЛОТАМ В ОБЪЕКТЕ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ МАСС- СПЕКТРОМЕТРИИ
У 36 детей проведено исследование мокроты и крови с помощью метода газовой хроматографии масс-спектрометрии (ГХ-МС). При ГХ-МС исследовании фракций ЖК, стеролов и ДМА в пробах найдено, что основными компонентами (на уровне относительного содержания более 1%) являются четные кислоты с 12 - 18 атомами углерода: С18:1, С16:0, С18:2, С18:0, С16:1 (в порядке уменьшения содержания в профиле ЖК), а также полиненасыщенные ЖК С20:п, С22:п, холестерин, насыщенные
прямоцепочечные альдегиды и 2-гидроксикислоты.
Иногда величину 1% превышает содержание длинноцепочечных кислот С20 - С26. Нечетные кислоты - С15:0 и С17:0 составляют около 1% каждая.Перечисленные выше вещества являются липидными компонентами клеток организма человека и составляют естественный фон, на котором в исследованных пробах выявлены минорные компоненты, не характерные для макроорганизма. Хроматограммы, полученные по методу селективных ионов, позволяют уверенно детектировать микробные компоненты на фоне преобладающих компонентов крови (рисунок 14).
Рисунок 14.Селективные масс-фрагментограммы жирных кислот (ион 87, верхний график), жирных альдегидов (ион 75, в середине) и гидрокси-кислот (ион 175, нижний график).
В клиническом материале (мокрота, кровь) обследованных детей с ОСЛ(крупом) обнаружены разветвленные жирные кислоты, гидроксикислоты, специфические ненасыщенные и циклопропановые кислоты, характерные для клеточных стенок и мембран микроорганизмов.
Рисунок15. Больной А. Алексей. Маркеры грамотрицательных микроорганизмов до (зеленая хроматограмма) и после лечения (черная хроматограмма).
Как видно из рисунка пик при 10 мин соответствует бета-гидрокси- лауриновой кислоте (маркер Moraxella), 11.40 мин - бета-гидрокситридекановой кислоте (маркер Selenomonas), 12.8 мин - бета-гидрокси- миристиновой кислоте (маркер Fusobacterium/Haemophylus). Из сопоставления хроматограмм видно, что численность Selenomonasне изменилась, а Moraxellaи Fusobacterium/Haemophylus- возросла.