ВЛИЯНИЕ АНТРОПОГЕННОЙ НАГРУЗКИ НА АКТИВНОСТЬ ПРОТЕИНАЗ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА ЛЕЩА (ABRAMIS BRAMA) РЫБИНСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА
Н.В. Ушакова1, В.В. Кузьмина1, О.П. Лупилов2, В.А. Шептицкий2 Учреждение Российской академии наук Институт биологии внутренних вод им.
И.Д. Папанина РАН, п. Борок, Ярославская обл., Россия Приднестровский государственный университет им. Т.Г. Шевченко, г. Тирасполь, Молдова e-mail: koryukaevan@ibiw.yaroslavl.ru ВведениеВ последние годы особое внимание уделяется антропогенному воздействию на водные экосистемы. Выявлены факторы, влияющие на состояние гидробионтов (Toxicology of fishes, 2008). Поскольку энтеральная среда рыб является частью внешней среды (Thomas, 1964), можно ожидать, что усиление антропогенного пресса должно отражаться на состоянии ферментных систем пищеварительного тракта рыб. Действительно, в экспериментальных условиях было показано, что тяжелые металлы значительно снижают уровень активности гликозидаз и протеиназ слизистой оболочки кишечника рыб (Kuz'mina et al., 1999; Golovanova et al., 1999; Кузьмина, Ушакова, 2007а). Вместе с тем токсические вещества органической природы (дихлофос и нафталин) не всегда снижают активность пищеварительных гидролаз (Kuz'mina et al., 1999; Golovanova et al., 1999). Состояние ферментных систем пищеварительного тракта рыб, обитающих в различных участках Рыбинского водохранилища после аварии на Череповецком металлургическом комбинате, произошедшей в конце 1986 г. (Флеров, 1990), ранее не оценивалось. Вместе с тем данные, касающиеся активности пищеварительных ферментов, особенно протеиназ, важны для как оценки начальных этапов ассимиляции пищи отдельными особями, так и для оценки состояния кормовой базы биотопов и условий питания рыб. Цель работы состояла в изучении активности протеи- наз слизистой оболочки кишечника леща, обитающего в различных участках Рыбинского водохранилища, в разной степени подверженных антропогенному прессу.
Материалы и методы
Работа проведена 2008-2009 гг.
Объект исследования: лещ Abramis brama (L.) массой 889 ± 48 г. Материал отбирали в августе 2008 на 5 станциях, расположенных в разных плесах (Коприно и Волково - Волжский, Первомайка - Моложский, Мякса и Любец - Шекснинский плес). Кишечники рыб, отловленных донным тралом, сразу изымались и замораживались. В лаборатории после разморозки кишечника на холоду изымали содержимое. Специальным скребком снимали слизистую оболочку кишечника и индивидуально гомогенизировали ее при помощи стеклянного гомогенизатора, добавляя охлажденный до 2-4°С раствор Рингера для холоднокровных животных (109 mM NaCl, 1.9 mM KCl, 1.1 mM CaCl2) в соотношении 1:99. Определяли активность протеиназ слизистой оболочки кишечника при температуре 20°С и рН 7.4, в качестве субстрата использовали 1% раствор казеина (преимущественно трипсин КФ 3.4.21.1). Для изучения температурных характеристик про- теиназ готовили суммарные пробы, включающие материал от 10 экз. рыб (7 экз. на станции Лю- бец). Изучение температурных характеристик ферментов леща проводилось в широком диапазоне значений температуры (0-70°С). Активность протеиназ определяли по приросту тирозина методом Ансона (Anson, 1938) в некоторой модификации. Инкубацию субстрата и ферментативно активного препарата проводили в течение 30 мин. Количество продуктов реакции (преимущественно тирозин) определяли при помощи фотоэлектроколориметра КФК-2 (длина волны 670 нм). Ферментативную активность определяли в 4-х повторностях для каждой точки с учетом фона и выражали в мкмоль/(г-мин). Энергию активации (Еакт) рассчитывали графическим методом Аррениуса. Данные обрабатывали статистически с использованием приложения EXCEL программы MS Office'XP. Достоверность результатов оценивали по Стьюденту при уровне значимости р