Техника микроскопирования дрожжевых грибов

При изучении морфологии дрожжей следует учитывать, что в зависи­мости от условий выращивания продолжительность развития и активность размножения их может меняться. Интенсивное размножение характерно для молодых дрожжей (12-16-часовая культура), у зрелых (24-48-часовая культу­ра) - процесс почкования замедляется.

Для изучения морфологии дрожжей рекомендуется использовать чис­тые культуры, выращенные на жидком 6-7 %-м сусле по Баллингу или на сусло-агаре (СА).

Форму и размеры вегетативных клеток, характер вегетативного раз­множения наблюдают на 24-48-часовых культурах. Из культур дрожжей го­товят прижизненные препараты в капле воды и микроскопируют их, пользу­ясь объективом х40.

Способность дрожжей к спорообразованию выясняют на 5-10- суточных культурах, выращенных на СА. Однако у некоторых дрожжей спо­собность к спорообразованию установить трудно. Проверить способность дрожжей к спорообразованию можно при переносе культуры на субстрат, не содержащий питательных веществ, где вегетативное размножение дрожже­вых клеток будет исключено. В качестве такого субстрата можно рекомендо­вать пластинки голодного агара. На них высевают взвесь культуры дрожжей из жидкого сусла и выращивают в термостате при 22-25°С.

Из материала, культивируемого на признак спорообразования дрож­жей, готовят прижизненные препараты и микроскопируют их, пользуясь объ­ективом х40. Просматривая препараты, прежде всего обращают внимание на способ спорообразования (из зигот или вегетативных клеток) и на форму опор (шаровидные, овальные, бобовидные и т.

Как правило, дрожжевые клетки содержат значительное количество разнообразных запасных компонентов: волютиновые зерна, гранулёзу, гли­коген, жировые включения. Для выявления этих включений пользуются ок­раской фиксированных препаратов по методу Муромцева. Готовят фиксиро­ванный мазок, затем окрашивают его в течение 1 минуты краской по Муром­цеву, которая содержит раствор фуксина основного 0,16 г, спирт этиловый 96 %-й 20 мл, воду дистиллированную 200 мл. На препарате зёрна волютина должны быть окрашены в фиолетовый цвет, цитоплазма - в голубой.

Задание

Ознакомиться с характерными особенностями строения дрожжевых грибов.

План выполнения работы

1. Из культуры дрожжей рода Saccharomyces приготовить препарат ти­па «раздавленная капля». Промикроскопировать препарат с объективом х40. Рассмотреть и зарисовать форму клеток и их строение: цитоплазму, вакуоли и включения запасных питательных веществ. Цитоплазма обнаруживается при микроскопировании как более темная зернистая масса, вакуоли имеют вид светлых просвечивающихся пятнышек. Капли жира светлые, блестящие благодаря сильному преломлению света; включения имеют вид плотных зер­нышек. Найти и зарисовать почкующиеся клетки.

2. Окрасить препарат раствором метиленовой сини до темно-голубого цвета. Отметить наличие живых (почкующихся) клеток и окрашенных в си­ний цвет (мертвых).

3. Из материала, культивированного на признак спорообразования дрожжей, приготовить препарат и промикроскопировать. Отметить способ спорообразования, форму спор. Зарисовать.

4. Приготовить фиксированные препараты дрожжей и окрасить их краской по Муромцеву. Промикроскопировать с иммерсионным объективом, отметить цвет зерен волютина и цитоплазмы.

Вопросы для самостоятельного контроля

1. В чем заключаются особенности морфологического строения дрож­жевых грибов?

2. Каковы причины мицелиально-дрожжевого диморфизма?

3. Какими способами осуществляется размножение у дрожжевых гри­бов?

4. Какими признаками характеризуются аскомицетовые дрожжи?

5. Какие дрожжевые грибы широко используются в пищевой промыш­ленности?

6. Какими признаками характеризуются аспорогенные дрожжи?

7. Имеются ли среди дрожжевых грибов патогенные для человека ви­ды? Какие заболевания они вызывают?

8. Какие промышленно важные биологически активные вещества обра­зуют дрожжи?

9. Какое значение в природе имеют дрожжевые грибы?

10. Как дрожжи используются в хозяйственной деятельности человека?