Получение накопительной культуры нитрифицирующих бактерий
Чтобы получить культуры нитрифицирующих бактерий, используют минеральные среды, предложенные С.Н. Виноградским. Для возбудителей первой фазы питательная среда содержит сульфат аммония в качестве источника азота, а для возбудителей второй фазы - нитрит натрия.
Среды разливают в колбы слоем 1-1,5 см и культивируют в течение 2-3 недель. Присутствие нитрификаторов в культуре определяют при микроскопировании и по качественным реакциям на наличие нитритов и нитратов в культуральной жидкости.Задание
Изучить особенности морфологии нитрифицирующих бактерий.
План выполнения работы
1. Приготовить прижизненные препараты накопительных культур I и II фаз нитрификации, подкрасить метиленовым синим и промикроскопировать. Сделать зарисовки.
2. Проверить изменение среды по фазам нитрификации. С этой целью в средах для возбудителей I фазы нитрификации проводят качественную реакцию на азотистую кислоту реактивом Грисса. Несколько кристалликов реактива добавляют к 2-3 мл культуры и подогревают суспензию; появление малиновой окраски указывает на наличие нитритов.
3. В средах для возбудителей II фазы нитрификации проводят реакцию на азотную кислоту дифениламином. Дифениламин вызывает синее окрашивание в присутствии не только азотной, но и азотистой кислоты. Поэтому для определения наличия азотной кислоты азотистую кислоту необходимо предварительно исключить, что достигается добавлением к среде мочевины. К 1 мл культуры добавляют несколько мг мочевины (на кончике скальпеля), 10 капель крепкой серной кислоты и 10 капель реактива дифениламина. Интенсивное синее окрашивание свидетельствует о присутствии азотной кислоты.
Вопросы для самостоятельного контроля
1. Какие микроорганизмы называются хемолитоавтотрофами? Кто обнаружил такой способ существования бактерий?
2. На какие подгруппы делятся хемолитоавтотрофные бактерии? Какой признак лежит в основе этого деления?
3. Где обнаруживаются бесцветные сероокисляющие бактерии? Какова их роль в природе?
4. Какими признаками характеризуются железобактерии?
5. Какую фазу нитрификации осуществляют бактерии рода Nitrospira?
6. Какую фазу нитрификации осуществляют бактерии рода Nitrosococcus?
7. Как можно получить накопительную культуру нитрифицирующих бактерий? Какие факторы используются для создания элективных условий?
8. Какие качественные реакции позволяют выявить наличие нитратов и нитритов в культуральной жидкости?
9. В чем заключается особенность дыхательной цепи хемолитоавтотрофных бактерий?
10. К каким подгруппам хемолитоавтотрофных бактерий относятся представители родов Thiobacillus, Siderocapsa, Nitrobacter?