Определение содержания полифенолов и лигнина (по Кйнгу и Хису)
Содержание полифенолов и структурных элементов растительных тканей (лигнин и клетчатка) во многом определяет темпы их разложения животными. Только что опавшие листья с высокой концентрацией соединений полифенольного ряда являются несъедобными для многих видов сапрофагов.
Животные, если и заглатывают ткани только что опавших листьев, то почти не переваривают их. Лишь после выщелачивания значительной части полифенолов животные начинают потреблять и усваивать растительные ткани. Структурные свойства листвы влияют на скорость113
ее потребления. Листья с высоким содержанием лигнина и клетчатки часто медленнее поедаются животными, хотя их усвояемость оказывается часто не ниже, в сравнении с легко разрушаемыми видами опада. Для оценки питательных свойств листового опада имеет большое значение количественное определение содержания полифенолов, лигнина и клетчатки.
Ниже приводится описание метода определения концентрации полифенолов и лигнина в маленьких навесках растительных остатков (King, Heath, 1967): 200—500 мг воздушно-сухого опада, размельченного в ступке и просеянного через сито с отверстиями диаметром 0,2 мм, экстрагируют 10 мл петролейного эфира в закрытой колбе в течение суток. Затем экстракт фильтруют через бумажный фильтр, промывают небольшими порциями эфира. Фильтрат испаряют в струе воздуха, высушивают в вакууме и осадок взвешивают.
После экстракции петролейним эфиром осадок высушивают до воздушно-сухого состояния и затем экстрагируют 10 мл 50% - ного водного раствора метанола. Экстракцию проводят в закрытой колбе в течение суток, а затем экстракт отфильтровывают от осадка на бумажном фильтре в мерную колбу емкостью 100 мл. Осадок промывают водой и метанолом так, чтобы в мерной колбе в конце процедуры оказалось бы не более 15 мл метанола. При промывании из осадка удаляются остатки сахаров и полифенолов.
Экстракт доводят водой до 100 мл.В растительных тканях содержится сложная смесь полифенр- лов, которую трудно разделить. Поэтому предлагается метод определения относительной редуцирующей способности экстрагированных полифенолов с помощью реактива Фолина — Дени.
5 мл реактива Фолина приливают к определенному количеству метанольного экстракта в мерной колбе на 100 мл. Через 3 мин. туда добавляют 10 мл насыщенного раствора соды и доводят объем до 100 мл водой. Раствор взбалтывают в течение часа, фильтруют, если это необходимо, и определяют его оптическую плотность при длине волны 725 ммк в кювете толщиной 1 см в сравнении с бланком. Содержание полифенолов выражается значением разницы оптической плотности раствора и бланка, помноженной на 10_3 и отнесенной к воздушно-сухому весу беззольной части растительных тканей.
Содержание лигнина определяют в осадке, оставшемся после экстракции петролейным эфиром и метанолом. К воздушно-сухому материалу приливают 15 мл 72%-ной серной кислоты. Смесь взбалтывают в течение двух часов, а затем разводят ее в 100 мл воды и переносят в коническую колбу емкостью 750 мл. Колбу нагревают на кипящей водяной бане в течение 4 час., а затем лигнин отфильтровывают на фильтре Нуча № 3. Лигнин промывают горячей водой, этанолом и эфиром, высушивают при 105° и взвешивают. После этого определяют вес золы. Содержание лигнина рассчитывают на беззольное сухое вещество.
114