МЕТОДЫ ФИКСАЦИИ ПОЧВООБИТАЮЩИХ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ

Б. Р. Строганова

Большая часть почвообитающих беспозвоночных может быть идентифицирована лишь после их фиксации, и только для эн- хитреид и некоторых групп моллюсков разработаны методы прижизненного определения.

Для фиксации представителей мезофауны и микроартропод наиболее широко применяются 70—80°-ный этиловый спирт и 4%-ный формалин. При разведении спирта и формалина для приготовления фиксатора необходимо использовать дистилли­рованную, дождевую или несколько раз прокипяченую воду. В случае разведения этих реактивов жесткой водой часто на­блюдается выпадение хлопьевидного осадка, который портит фиксированный материал. Не допускается также использовать воду, окрашенную окислами тяжелых металлов, которая может изменить окраску и структуру покровов животных.

При длительном хранении в спирте или формалине живот­ные теряют упругость покровов и размягчаются, либо, наобо­рот, сморщиваются, становятся хрупкими и ломаются. В таких случаях их идентификация или использование для более тон­ких морфологических исследований становится невозможным. В настоящее время для отдельных групп почвенных беспозво­ночных разработаны специфические методы фиксации с учетом особенностей покровов и структуры животных и рекомендуют­ся различные фиксирующие смеси, составленные на основе рас­творов спирта либо формалина.

Личинок насекомых с сильно склеротизованными покрова­ми, таких, как проволочники и ложнопроволочники, а также литобиид, фиксируют 70°-ным спиртом с добавлением глицерина (2—3%). Глицерин способствует сохранению эластичности ш> кровов. Через 2—3 недели материал переносят в чистый 70°-ный спирт, в котором он сохраняется годами.

При фиксации личинок насекомых с более мягкими покро­вами (личинки мягкотелой, жужелиц, азилид) рекомендуется добавлять в спирт некоторое количество формалина для предо­хранения покровов животных от мацерации.

49

Крупные личинки с белыми мягкими покровами (личинки пластинчатоусых, долгоносиков, многих двукрылых) в спирте или формалине темнеют и теряют свою форму, вследствие ми­кробиальных и автолитических процессов, развивающихся в их кишечнике после фиксации, пока фиксатор не пропитает все внутренние органы. Поэтому их рекомендуется фиксировать кипятком. Личинок заливают кипящей водой, а после того, как они всплывают, помещают в спирт. При обваривании кипятком происходит свертывание белков, что способствует сохранению формы тела и окраски покровов. Крупных личинок следует по­варить в кипятке 2—3 мин. При этом нужно следить, чтобы по­верхность воды, в которой варятся личинки, была спокойной. При бурном кипении пузырьки воздуха, выделяющиеся из тка­ней животных, могут деформировать их тело. При обваривании кипятком у мягких личинок расправляются покровы и на них становятся видны различные структуры, которые трудно заме­тить на живых или зафиксированных другими способами жи­вотных. Часто эти внешние структуры имеют диагностическое значение. Поэтому в некоторых определительных таблицах опи­сание строения животных дается по материалу, фиксированно­му кипятком (Brauns, 1968). После фиксации кипятком ’личи­нок рекомендуется некоторое время держать в спирте с приме­сью формалина, а затем уже переносить их в чистый 70°-ный спирт.

Особые трудности представляет фиксация гусениц. В боль­шинстве своем это формы с мягкими покровами, требующие специальной обработки для сохранения формы тела. Однако фиксация кипятком либо формалином разрушает окраску и ри­сунок покровов, которые являются важными диагностическими признаками. Для фиксации гусениц предлагается специальная смесь следующего состава: спирт, салициловая кислота, пова­ренная соль (реактив), дистиллированная вода.

2 г салициловой кислоты растворяют в 100 мл 96°-ного спир­та. Раствор смешивают с 100 мл 1%-ного раствора поваренной соли.

Для личинок насекомых и многоножек со светлыми или про­зрачными покровами рекомендуются также следующие смеси, в которых сохраняются окраска и структура покровов живот­ных без предварительной обработки кипятком:

спирт (96°-ный) —6 мл, формалин (40%-ный) — 15 мл, ледя­ная уксусная кислота — 2 мл, дистиллированная вода — 30 мл (van Emden, 1958; Гиляров, 1964);

50

спирт (96°-ный)—750 мл, эфир — 250 мл, ледяная уксусная кислота — 30 мл, формалин (40%-ный)—3 мл (Wallwork, 1970).

Моллюсков перед фиксацией помещают в сосуд, до краев за­полненный кипяченой водой и закрытый крышкой. При этом моллюски высовываются из раковин и в таком положении поги­бают от недостатка кислорода. После этого их фиксируют в спирте, сначала сильно разведенном, а затем переносят в рас­творы все повышающейся концентрации. После этого моллюски могут долго храниться в 70—80°-ном спирте. В их теле содер­жание воды очень высокое, поэтому если моллюсков поместить сразу в 70°-ный спирт они могут отдать всю воду, сморщатся и станут непригодными для определения.

/ Дождевых червей фиксируют слабым раствором формали­на, в котором они сначала очень активно двигаются, извивают­ся и затем погибают в скрученном состоянии. Сразу после того, как животные перестанут двигаться в растворе, их надо вынуть, расправить на фильтровальной бумаге и ваткой стереть слизь. Через несколько минут, когда черви несколько подсохнут и за­фиксируются в расправленном состоянии, их помещают в длин­ные химические пробирки с 4%-ным раствором формалина, в котором они долго сохраняют форму тела и могут использо­ваться для морфологических исследований (Малевич, 1951).

Мермитиды, обнаруженные в почве, фиксируются в 40°-ном спирте, либо 3—4%-ном формалине, либо в специальной сме­си— жидкости Барбагалла следующего состава: 100 мл ди­стиллированной воды, 30 мл 40%-ного формалина, 8 г поварен­ной соли (реактив). Эта смесь представляет собой изотониче­ский раствор, в котором мермитиды сохраняют эластичность покровов и окраску. В почве эти черви встречаются в сильно скрученном состоянии. Поэтому перед фиксацией их необходи­мо расправлять. Расправление проводится в воде при нагрева­нии до 40°С. К воде иногда прибавляют 1% хлоральгидрата. При этом мышцы червей расслабляются и черви растягивают­ся. Процедура растягивания длится около часа. У нерасправ- ленных червей покровы затвердевают и становятся хрупкими. Если они были зафиксированы в нерасправленном состоянии, их следует растягивать в смеси 35—50°-ного спирта с молочной кислотой в отношении 1 : 1 в течение 18—24 час. Затем червей отмывают от молочной кислоты спиртом (Положенцев, Артю- ховский, 1963).

Мелкие беспозвоночные, относящиеся к микрофауне, фикси­руются при экстракции из почвы 70°-ным спиртом. Нематоды фиксируются последовательно 5- и 10%-ным раствором форма­лина, в последнем они могут и храниться долгое время. «Для оп­ределения и подсчета количества микроартропод и нематод, как правило, практикуется приготовление постоянных или времен­ных препаратов на предметных стеклах. Для определения нема-

51

тод, симфил и простигматических клещей рекомендуется приго­товление временных препаратов с лактофенолом, который сме­шивается с поливиниловым спиртом в отношении 1:1. Этот со­став одновременно просветляет покровы и тем самым облегчает определение (Wallwork, 1970).

Для панцирных клещей и коллембол, как правило, использу­ется жидкость Фора-Берлезе, удобная для быстрого приготовле­ния постоянных препаратов: гуммиарабик — 30 г, дистиллиро­ванная вода — 50 г, хлоральгидрат — 200 г, глицерин — 20 г. При приготовлении этой смеси гуммиарабик заливают сначала водой и выдерживают в термостате при 37° С до полного растворения.

Постоянные препараты микроартропод, однако, редко пол­ностью удовлетворяют требованиям систематиков. При микроско­пическом изучении материала некоторые детали строения живот­ных невозможно рассмотреть. Поэтому в последнее время все шире распространяется применение временных препаратов на предмет­ных стеклах с выемкой. Выемка неполностью прикрывается по­кровным стеклом, и в это открытое пространство пипеткой вносят каплю молочной кислоты или глицерина. Животных помещают в эту каплю рядом с краем покровного стекла. При микроскопи­ческом изучении животных их можно поворачивать легким дви­жением покровного стеклышка, либо тонкой препаровальной иг­лой. После этого животных снова можно возвращать в спирт или другой постоянный фиксатор. Коллекции клещей рекомендуется хранить в жидкости, состоящей из 1 части глицерина и 9 частей 70°-ного спирта. Клещей помещают в полиэтиленовые микропро­бирки, заполненные до краев этой жидкостью (Вагг, 1973). Дли­тельное хранение в молочной кислоте не рекомендуется в по­следнее время, так как животные в ней становятся хрупкими и со временем у них могут отламываться хеты, конечности и другие детали, необходимые для идентификации.