Метод люминесцентно-микроскопического наблюдения
микроорганизмов в почвенных монолитах (по Звягинцеву). Приготовляют цилиндрическую формочку (диаметр и высота по 1 см) из нержавеющей стали, пластмассы или стекла, имеющую острые края.
Вдавливают формочку в почву исследуемого горизонта и осторожно вынимают ее так, чтобы над краями формочки возвышался слой почвы. Острой бритвой срезают почву, чтобы верхняя грань монолита была на уровне краев формочки. На поверхность почвы капают водный раствор акридинового оранжевого (1:1000) и накрывают ее очень тонким покровным стеклом (0,10-0,12 мм). Через 10-20 мин исследуют в люминесцентном микроскопе с иммерсионным объективом (х90) в отраженном свете. Основные трудности метода заключаются в подборе подходящей концентрации красителя; для каждой почвы она подбирается опытным путем.Санитарно-микробиологический анализ почвы
В практике сравнительно редко встречается возможность прямой количественной оценки опасной микрофлоры, гораздо чаще приходится прибегать к косвенному методу - определению суммарного микробного обсеменения того или иного объекта. При этом исходят из предположения о том, что вероятность проникновения в объект потенциально опасной микрофлоры будет тем выше, чем большими окажутся величины «микробного числа».
Логическая обоснованность этой гипотезы не вызывает сомнений, но в природных условиях она правильна лишь в статистическом плане. Критерий суммарного микробного обсеменения объектов внешней среды служит основанием только для приближенных, относительных оценок. Тем не менее, этот показатель имеет определенную сравнительную ценность и поэтому широко используется в санитарно-микробиологической практике.
Почвы считаются чистыми, если в 1 г почвы содержатся десятки тысяч микроорганизмов; умеренно загрязненными, если содержатся сотни тысяч, и грязными - если миллионы.
Далее определяют содержание в почве кишечной палочки.
В санитарно-гигиеническом отношении важно не только зарегистрировать факт наличия кишечной палочки в том или ином субстрате, но важно учесть и количественную сторону данного явления. Это необходимо для суждения об интенсивности фекального загрязнения. Для этой цели служат два показателя: ко- ли-титр и коли-индекс.Под титром кишечной палочки понимают наименьшее количество исследуемого материала, в котором обнаруживается одна кишечная палочка. Титр кишечной палочки выражают для жидкостей в миллилитрах или долях миллилитра, для твердых субстратов - в граммах или долях грамма. Коли- индекс - это количество особей кишечной палочки, обнаруженное в определенном объеме исследуемого объекта.
Численность кишечной палочки определяют методом разведений при высеве на дифференциально-диагностическую среду Эндо. Другим наиболее удобным методом для вычисления коли-индекса является метод мембранных фильтров. Готовят суспензию почвы 1:10 и ее разведения 1:100 и 1:1000. 1 мл взвеси вносят в стерильную пробирку с 50 мл воды и фильтруют через мембранные фильтры № 2 или № 3. Для удаления из взвеси крупных частиц проводят предварительную фильтрацию через фильтр № 6. После этого фильтры выкладываю на среду Эндо и инкубируют в течение 24 часов при температуре 37 °С. Проводят подсчет выросших колоний кишечной палочки и с учетом разведения делают пересчет на 1 г почвы. После установления коли-индекса определяют коли-титр по формуле:
коли-титр = 1/ коли-индекс.
По коли-индексу судят о чистоте почвы. Чистая почва не содержит ни одной кишечной палочки на 1 г почвы; слабозагрязненная - 10-100; умеренно загрязненная - 100-1000; сильнозагрязненная - более 1000.