Фазово-контрастная микроскопия
позволяет изучать живые и неокрашенные объекты за счет повышения их контрастности. Распространение световых волн в прозрачных однородных объектах не сопровождается потерей интенсивности света.
При прохождении света через неокрашенные объекты изменяется фаза световой волны, что и используется в фазово-контрастной и интерференционной микроскопии. Меняется скорость прохождения света через объект по сравнению со скоростью света в окружающей среде. Она будет большой или меньшей в зависимости от того будет ли показатель светопреломления объекта соответственно больше или меньше, чем в окружающей среде. Эти колебания, называемые фазовыми, так как при них меняется только фаза колебаний прошедшего света, характерны для большинства биологических объектов (рис. 6).
Глаз человека не способен воспринимать фазовые изменения света. Поэтому неконтрастные (фазовые) объекты при обычном микроскопическом исследовании остаются невидимыми. Zernike предложил специальное устройство конденсора и объектива, которые регулируют изменения фазы световых волн и превращают разность фаз в разность интенсивностей, благодаря чему детали строения объекта становятся доступными для глаз.
Для работы по методу фазового контраста нужно, кроме обычного биологического микроскопа, иметь еще специальное устройство. Установку устройства производят следующим образом. Кондерсор и объектив заменяют фазовыми. Основным условием является оптимальная освещенность, которая достигается установкой света по Келлеру. Фазовый конденсор поворотом револьверного диска устанавливают на 0. Это положение соответствует обычному светлопольному конденсору. Только после этого устаналивают револьверный диск на то число, которое соответствует выбранному объективу. Используют объективы апохроматы. Окуляр обычного светового микроскопа заменяется на вспомогательный, который настраивают на изображение двух колец (кольцевая диафрагма конденсора и фазовая пластинка). Для повышения контрастности фазовые кольца покрывают металлом, поглащающий прямой свет, не влияя на сдвиг фазы. Центрировочным устройством конденсора добиваются совмешения колец. Заменив вспомогательный окуляр на обычный можно производить исследование препарата.
Поляризационная микроскопия позволяет получить изображение неокрашенных анизотропных структур; интерференционная микроскопия, объединяющая принципы фазово-контрастной и поляризационной микроскопии применяется для получения контрастного трехмерного изображения неора- шенных обектов. Специальная интерференционная оптика (оптика Номарк- ского) нашла применение в микроскопах с дифференциальным интерференционным контрастом.