3.2.3. Изучение зависимости гибели клеток М. smegmatisот времени взаимодействия с хитозаном
|
|
100 -I |
|
,о |
|
|
о"^ |
80 ' |
|
-л |
|
|
о |
|
|
S |
60 - |
|
S |
|
|
|
40 - |
|
lt;Ц |
|
|
ю |
|
|
|
|
|
1-н |
20 - |
0 ж11111
0 10 30 60 120
Время экспозиции, мин
Рис.7.
Гибель клеток М. smegmatis(% от общего количества клеток) привзаимодействии с хитозанами при 37°С и рН 6,8 в зависимости от времени
экспозиции (мин); 1-хитозанМг| 4 кДа, 2- хитозан Мл. 11 кДа, 3- хитозан Мл.
24 кДа.
Было показано, что достаточно 10 мин контакта хитозана с культурой М.
smegmatis, чтобы 38-60% клеток потеряли жизнеспособность. Кроме92
в концентрации 0,1% и хитозаном из восковой моли Galleriamellonellaс Мп от 7-177 кДа и СД 89% в концентрации 0,1%, рН 6,8 на качалке при температуре 37°С в течение 1 ч на качалке. После этого пробы титровали и высевали на чашки Петри с питательной средой. В качестве контроля брали бактерии, не обработанные хитозаном. По истечении 72 часов инкубации определяли количество КОЕ. Результаты гибели М. smegmatis представлены на рисунке 6.
100 -I
100 л
¦?
amp; бо
о^
ММ, кДа
Рис.6. Влияние хитозанов с различной Мг| на гибель клеток М. smegmatis(%
от общего количества клеток) через 1 ч при 37 °С и рН 6,8; а - крабовый
хитозан, б - хитозан из восковой моли.
На рис.6 видно, что процент гибели клеток М. smegmatisпосле 60 мин экспозиции при 37°С и рН 6,8 составлял 0-76% в зависимости от Мп, испытанных образцов хитозана. Наименьшей чувствительностью тестируемый штамм обладал к высокомолекулярным образцам хитозана с Мг| 96 и 177 кДа. В случае их действия гибель клеток микобактерий составляла 29% и 13%, соответственно. Высокомолекулярный крабовый хитозан с Мц 396 кДа в концентрации 0,1 % не обладал антибактериальным действием. Максимальной активностью в отношении клеток микобактерий обладали низкомолекулярные хитозаны с Mrj 4-11 кДа, процент гибели
91
клеток достигал 76%. Необходимо отметить, что тенденция увеличения антибактериальной активности хитозанов с уменьшением их Мг| сохранялась и при взаимодействии клеток М. smegmatisс образцами хитозана восковой моли.
Таким образом, на основании результатов проведенных опытов можно сделать вывод о том, что препараты низкомолекулярного хитозана краба с Мг| от 4-24 кДа и СД 85% и низкомолекулярные хитозаны восковой моли с Мл. 7 и 11 кДа и СД 89% эффективно действуют на клетки М. smegmatis, вызывая, практически, их полную гибель.